促炎因子IL-8在圆锥角膜患者泪液中表达较高,但其作用机制尚不明确。胶原合成和降解异常是圆锥角膜的发病机制之一。通过探讨IL-8对正常角膜成纤维细胞胶原蛋白合成的影响及其分子机制,为进一步揭示圆锥角膜的发病机制提供参考。构建siRNA干扰体系,通过siRNA技术沉默角膜成纤维细胞中IL-8的表达;采用实时荧光定量PCR分析沉默IL-8后,促炎因子以及胶原合成和降解相关基因的表达变化;采用ELISA法检测总胶原的含量;采用明胶酶谱法检测MMP-2的活性;采用Western blot法检测沉默IL-8后相关信号途径关键蛋白的变化。结果发现:沉默IL-8表达后,角膜成纤维细胞总胶原含量及胶原合成基因（COL1A2,COL3A1,COL5A3,COL6A1）的表达显著升高,而胶原降解酶MMP-2的表达和活性下降;此外,沉默IL-8能够降低IL-6、IL-1β、VEGFA/VEGFR2基因和下游AKT、ERK1/2蛋白的表达。结果表明,IL-8调节角膜成纤维细胞中其他促炎因子及VEGF的表达,并通过PI3K/AKT、ERK信号通路负调控角膜成纤维细胞中胶原的合成,参与MMP-2介导的胶原降解过程。

国家自然科学基金资助项目（31300770,11872262,12072218）；山西省自然科学基金资助项目（201701D121144）；

1 实验材料和方法
1.1 角膜成纤维细胞的提取及培养
1.2 siRNA序列的设计及细胞转染
1.3 实时荧光定量PCR(qPCR)检测基因表达
1.4 酶联免疫吸附法(ELISA)检测总胶原含量
1.5 明胶酶谱检测MMP-2活性
1.6 Western blot检测蛋白的表达
1.7 数据分析
2 结果
2.1 IL-8 siRNA干扰效率
2.2 IL-8对人角膜成纤维细胞胶原合成基因表达及胶原含量的影响
2.3 IL-8对人角膜成纤维细胞MMP-2基因表达及活性的影响
2.4 IL-8对下游信号途径表达的影响
2.5 IL-8对其他促炎因子表达的影响
3 讨论

孙宇宁,宋婕,李晓娜,陈维毅,贺瑞,杨继忠,姚蔚.IL-8对角膜成纤维细胞胶原合成的影响[J].太原理工大学学报,2021,52(04):662-668.